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      English

      培養基主要營養類原材料生物學檢驗

      發布時間:2022-09-05    瀏覽次數:149

      生物學指標檢驗是培養基營養類原材料最主要和最關鍵的指標,直接關系培養基的質量好壞。原材料生產廠家和培養基生產廠家都應重點進行檢測。主要檢測的指標有可發酵糖試驗、H?S試驗、靛基質(吲哚)試驗、V-P試驗、生長試驗、色素試驗、菌落總數檢測和耐熱芽孢桿菌總數等。

      1. 可發酵糖試驗

      稱取樣品2.0g、氯化鈉0.5g、酚紅0.002g、蒸餾水或去離子水100mL,配制成溶液,調節其pH值至7. 2~7.4,分裝于含有小倒管的試管中,每管6. 0mL,115°C高壓滅菌15min后,接種大腸埃希氏菌和鼠傷寒沙門氏菌18h~24h的新鮮培養物,35°C±2°C培養18h~24h,觀察結果。陰性結果:培養基顏色為橙紅色或紅色,不產氣。

      陽性結果:培養基顏色變成黃色,產氣或不產氣。

      2. H?S 試驗

      稱取樣品1. 0g、氯化鈉0.5g、蒸餾水或去離子水100mL,配制成溶液,調節其pH值至7.2~7.6,分裝于試管中,每管6.0mL,121°C高壓滅菌15min后,接種鼠傷寒沙門氏菌的18h~24h的新鮮培養物,將醋酸鉛(PbAc)試紙插入試管中,試紙下端距離液面2cm~3cm,蓋好試管蓋30°C~35°C培養24h~48h,觀察結果。

      陽性結果:醋酸鉛試紙條變黑,且黑色域不得小于0.5cm。陰性結果:醋酸鉛試紙條不變黑或黑色域小于0.5cm。

      3. 靛基質(吲哚)試驗

      稱取樣品2.0g、氯化鈉0.5g、蒸餾水或去離子水100mL,配制成溶液,調節其pH值至7.2~7.6,分裝于試管中,每管6.0mL,121°C高壓滅菌15min;高壓滅菌后,分別接種大腸埃希氏菌、鼠傷寒沙門氏菌的18h~24h 的新鮮培養物,35°C±2°C培養18h~24h。觀察結果時每管加人2~4滴靛基質試劑。10s內液面上出現玫瑰紅色環者為陽性,出現黃色者為陰性。大腸埃希氏菌應為陽性,鼠傷寒沙門氏菌呈陰性。

      4. V-P試驗

      稱取樣品0.7g、葡萄糖0.5g、氯化鈉0.5g,加100mL的蒸餾水或去離子水配制成溶液,調節其pH值7.2~7.4,以每管6.0mL分裝,115°C高壓滅菌15min后,分別接種產氣腸桿菌、大腸埃希氏菌的18h~24h新鮮培養物,35°C±2°C培養18h~24h。觀察結果時,除去試管帽,依次加入VP試劑甲、乙液,甲液6滴,乙液2滴,混合均勻,放置36°C培養箱孵育30min,溶液變紅色為陽性,不變色為陰性。產氣腸桿菌呈陽性反應,大腸埃希氏菌呈陰性反應。

      5. 色素試驗

      稱取樣品2. 0g、氯化鈉0.5g、瓊脂1. 2g,加入100mL的蒸餾水或去離子水中,加熱完全溶解,調節pH值7.2~7.4,121°C高壓滅菌15min。高壓滅菌后,待溫度降到50°C左右時傾注平板,充分凝固后,四區劃線接種金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞桿菌的新鮮培養物,35°C±2°C培養18h~24h,觀察結果。應生長良好,金黃色葡萄球菌有黃色色素生成,銅綠假單胞菌有綠色色素生成。

      6. 生長試驗

      (1)質控菌株:大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、銅綠假單胞菌、福氏志賀氏菌、乙型溶血性鏈球菌。

      (2)液體培養基生長試驗(九管法)

            1)培養基配制:2.0g樣品、0.5g氯化鈉,加人到100mL的蒸餾水或去離子水中,加熱完全溶解,調節pH值至7.2~7. 4,分裝試管,每管9mL,121°C高壓滅菌15min后,冷卻備用。

            2)操作方法:將質控菌株18h~24h新鮮培養物用無菌水制成10?標準菌懸液(與標準比濁管比較),10倍梯度稀釋至10??,依次接種10??、10??、10??菌懸液于液體培養基管中,每個濃度重復3管,35°C±2°C培養18h~24h。同時用合格品做對照品,樣品應與對照品結果基本一樣或優于對照品時,判為合格。

      (3)固體培養基生長試驗(平皿定量滴加法)

            1)培養基配制:2.0g樣品、0.5g氯化鈉、1.2g瓊脂,加入到100mL的蒸餾水或去離子水中,加熱完全溶解,調節pH值7.2~7.4,121°C高壓滅菌15min后,倒平板,待充分凝固后并倒置于37°C培養箱1h~2h后,備用。

            2)操作方法:制備好的固體培養基,用記號筆成90°C交叉劃線分成四份,依次滴加10mL濃度為10?CFU/mL、10?CFU/mL、10?CFU/mL、10?CFU/mL的質控菌株菌液(見圖4-5-1),輕輕搖動,待菌液吸干后倒置于35°C±2°C培養18h~24h。同時用合格品做對照品,樣品應與對照品結果基本一樣或優于對照品時,判為合格。

      平皿定量滴加法

      (4)生長試驗結果評判
            1)九管法和平皿定量滴加法都合格時,此原材料適合絕大部分培養基使用。
            2)九管法合格,而平皿定量滴加法不合格時,此原材料適合于大部分液體培養基使用。
            3)九管法不合格,而平皿定量滴加法合格時,此原材料適合于大部分含瓊脂培養基使用。
            4)兩種都不合格時,此原材料為不合格,最好不要用于配制培養基。

      7. 菌落總數檢測

      稱取25g樣品溶解于225mL無菌蒸餾水或去離子水后,制成10倍系列稀釋液,選取兩三個適宜稀釋度,吸取1mL樣品液涂布于平板計數瓊脂(PCA)平板上,36°C±1°C培養48h±2h計數結果,需做2個重復。

      8. 耐熱芽孢桿菌檢測

      稱取25g樣品溶解于225mL無菌蒸餾水或去離子水后,制成10倍系列稀釋液,選取兩三個適宜稀釋度,吸取1mL樣品液涂布于葡萄糖胰蛋白胨瓊脂平板上,55°C±1°C培養48h±2h計數結果,需做2個重復。
      主要營養類原材料的生物學檢驗指標見表4-5-2。

      主要營養類原材料的生物學檢驗指標

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